ClearColi K12电转克隆感受态

产品简介

ClearColi K12 感受态细胞用电击法转化的效率较高，故不推荐使用热激法化学转化。ClearColi K12

菌株来源于 K12 endArecA-菌株，并在其中引入突变，导致 ClearColi K12 细胞壁外层的脂多糖被修

饰（LPS 的低聚糖链被删除，同时 LPS 的两个酰基链也被删除），进而破坏了 ClearColi K12 大肠

杆菌的内毒素信号通路，使得从该细胞中提取的蛋白或质粒 DNA 中的内毒素含量极低，提取的无

内毒素质粒广泛应用于后续的哺乳动物细胞转化。ClearColi K12 同时缺失核酸内切酶 (endA)和重组

酶 (recA)，提高了质粒 DNA 的产量和质量。吐露港生物开发的 ClearColi K12 电击感受态细胞经特

殊工艺制作，pUC18 质粒检测的电转化效率可达 107 cfu/μg DNA。

产品组成

组分

ClearColi K12

电转化感受态细胞

10 × 50 μL

100 × 50 μL

定制

基因型：F- λ- ∆endA ∆recA frr181 msbA52 ∆gutQ ∆kdsD ∆lpxL ∆lpxM ∆pagP ∆lpxP ∆eptA

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

电转化效率≥107 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，转入冰上预冷的电击转化杯中；

3. 使用电转仪进行电击转化（转化参数为：2 mm 电击杯，2.5 kv，200 Ω，电转化时间一般为 4-5

ms 左右）；

4. 电击后迅速取出电击杯，向其中加入 900 μL 液体 LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后

置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰上解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 不应含有较高的离子强度，建议总体积不超过 5 μl，一般为 1-2 μl；

3. 为确保*高转化效率，电转化杯一定要在冰上预冷；

4. 如使用 1 mm 电击杯，则转化参数改为 1.25 kv 和 200 Ω。