硝酸还原酶(NR)测试盒

硝酸还原酶(NR)测试盒

产品介绍：

硝酸还原酶（NiR）是一类能催化亚硝酸盐还原的酶，广泛存在于微生物及植物体内，是自然界氮循环过程中的关键酶，可以将亚硝酸盐降解为NO或NH3，从而减少环境中亚硝态氮的积累，降低因亚硝酸盐累积而造成的对生物体的毒害作用。

测定原理

亚硝酸还原酶可将NO2—还原为NO，使样品中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2—减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。

需自备的仪器和用品

天平、研钵、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、水浴锅、低温离心机。

检测原理：

硝酸还原酶可催化底物硝酸根（NO₃⁻）还原生成亚硝酸根（NO₂⁻），生成的亚硝酸盐可与对‑氨基苯磺酸、N‑1‑萘基乙二胺盐酸盐发生重氮偶联显色反应，生成紫红色有色复合物。

在特定波长 540 nm 下测定显色产物吸光度，亚硝酸盐生成量与样品中 NR 酶活性在一定浓度范围内呈线性正相关。

反应体系设置空白对照消除样品本身色素、内源亚硝酸盐带来的背景干扰；通过终止液快速淬灭酶促反应，精准把控酶促反应时间。

以亚硝酸盐标准曲线换算产物生成量，结合样品鲜重、反应时间、取样体积，最终计算得到硝酸还原酶活性。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。