细胞色素b5含量测试盒

细胞色素b5含量测试盒

产品介绍：

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，在外源物质代谢中具有重要作用，尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。

测定原理：

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后，在424nm处有最大吸收峰，通过测定424nm和490nm处吸光值的差异，即可计算出细胞色素b5的含量。

自备仪器和用品：

普通离心机，超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

检测原理：

氧化‑还原差光谱原理：细胞色素 b₅氧化态与还原态吸收光谱存在差异；加入还原剂（连二亚硫酸钠）将样本中细胞色素 b₅全部还原。

特征双波长检测：选择 424 nm（还原态峰值）与 409 nm（氧化态参考峰）的吸光度差值定量，排除其他血红素蛋白干扰。

摩尔消光系数定量：利用细胞色素 b₅已知摩尔消光系数，由吸光度差直接计算样本中血红素蛋白摩尔浓度。

蛋白浓度归一化：同步测定样本总蛋白含量，最终结果以 nmol/mg 蛋白表示细胞色素 b₅含量。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。