3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测试盒

商品属性：

商品介绍：

3-磷酸甘油醛脱氢酶分为胞质型和质体型，细胞质中的 3-磷酸甘油醛脱氢酶（EC1.2.1.12）是糖酵解的中枢
环节之一，特异的以 NADH 为辅酶，催化 3 磷酸甘油醛形成 1,3 二磷酸甘油酸的可逆反应，与糖异生途径及
体内血糖浓度的维持、糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。

本试剂盒耦联 3-磷酸甘油酸激酶，以三磷酸甘油酸为底物，于 340nm 处测定 NADH的下降速率来得出
NADH-GAPDH 酶活性的大小。

所需实验用品：
可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、可调式移液器、天平、低温离心机

试剂组成与配制：

样本前处理步骤：

‌1、细菌/培养细胞‌：收集样本弃上清，每500万细胞加入1ml提取液，冰浴超声破碎（功率20%，超声3s间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清冰浴待测。

‌2、动物/植物组织‌：称取约0.1g组织，加入1ml提取液冰浴匀浆，超声破碎后8000g 4℃离心10min，取上清待测。

3‌、血清/血浆样本‌：取100μL血清加入1ml提取液充分混匀，沸水浴振荡提取10min，10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

‌4、样本保存‌：2-8℃可保存1天，长期保存需分装后置于-20℃或-70℃冻存，避免反复冻融。

样本前处理：

‌一、组织样本‌

离体后立即液氮速冻，取0.1g新鲜组织按1:10比例加入预冷提取液。

冰浴条件下充分匀浆，超声破碎30次（功率20%，超声3s/间隔10s）。

8000g 4℃离心10min，取澄清上清置于冰上待测。

‌二、细胞/细菌样本‌

收集500万~1000万细胞，弃去培养基后加入1mL预冷提取液。

冰浴超声破碎，8000g 4℃离心10min，取上清待测。

三、液体样本‌

血清/血浆样本按1:10比例加入提取液，沸水浴振荡提取10min。

10000g常温离心10min，取上清冷却后待测。

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安全与操作注意事项：

1、底物试剂有一定毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，操作时需佩戴手套做好防护。

2、吸取液体时选择量程匹配的移液器，避免枪头直接接触孔内液体，减少误差。

3、温浴时用不干胶封好酶标板，防止水分蒸发影响反应体系体积。

4、底物试剂见光易分解，需临用前现配，全程尽量避光操作。

5、实验废弃物需按相关生物安全法规妥善处理，不可随意丢弃。