早期内吞体相关蛋白1抗体 新品

早期内吞体相关蛋白1抗体

原理特点

靶向EEA1，是早期内吞体的标志蛋白。它通过FYVE结构域结合PI3P，锚定在内吞体膜上，介导内吞小泡的栓系和融合。该抗体用于研究内吞途径、膜运输和受体信号调控。
英文名称:EEA1 Rabbit pAb
中文名称:早期内吞体相关蛋白1抗体

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:Early endosome antigen 1; Early endosome antigen 1, 162kD; Early endosome associated protein; EEA 1; EEA1; EEA1_HUMAN; Endosome associated protein p162; Endosome-associated protein p162; MST105; MSTP105; ZFYVE2; Zinc finger FYVE domain containing protein 2; Zinc finger FYVE domain-containing protein 2.

交叉反应:Human,Hamster

抗体来源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human EEA1

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Polyclonal

理论分子量：162 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景

EEA1 是早期内吞体标志性支架蛋白，结合 Rab5-GTP 锚定膜结构，调控胞吞物质分选、早期内吞体融合成熟。

介导生长因子受体、营养物质、病毒颗粒胞内转运；肿瘤细胞上调 EEA1 增强受体循环，放大 EGFR、整合素促转移信号。

经典早期内吞体荧光标记物，免疫荧光可清晰标记早期胞吞囊泡，用于胞吞、膜转运、病毒入侵机制实验。
核心实验操作方法

1. Western Blot（WB）

抗体孵育

一抗孵育：用5%脱脂牛奶或BSA稀释抗体至推荐浓度（如1:1000），4℃摇床缓慢孵育过夜；或室温孵育1-2小时，孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中。

洗涤：用TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟，洗去未结合的一抗；加入HRP标记二抗（1:5000-1:10000稀释），室温孵育1小时。

显影：再次洗涤后，加入ECL发光液孵育1-2分钟，用化学发光成像仪采集图像，根据信号强度调整曝光时间。

2. 免疫组化（IHC）

抗体孵育

一抗孵育：滴加稀释后的一抗（如1:200）于组织切片上，置于湿盒中4℃孵育过夜；次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟。

二抗结合：加入生物素标记二抗（1:200）室温孵育30分钟，PBS冲洗后加入ABC复合物（1:100）室温孵育30分钟。

显色封片：DAB显色剂显色3-10分钟（显微镜下观察控制时间），苏木素复染1分钟，梯度乙醇脱水后中性树胶封片。

3. 免疫荧光（IF）

抗体孵育

一抗孵育：用5% BSA稀释抗体至工作浓度（如1:100），滴加在细胞爬片上，4℃避光孵育过夜；室温复温后PBS冲洗3次，每次5分钟。

二抗结合：加入荧光标记二抗（如FITC标记抗兔IgG，1:200），室温避光孵育30-60分钟；PBS冲洗后用抗淬灭封片液封片。

观察：荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察，激发波长根据二抗标记物选择（如FITC为488nm）。

4. ELISA实验

包被与孵育

包被：用包被缓冲液（pH9.6碳酸盐缓冲液）稀释抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃过夜孵育。

封闭与一抗孵育：弃去包被液，PBST洗涤3次，加入5% BSA封闭液200μl/孔，37℃孵育1小时；加入稀释后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。

检测：洗涤后加入酶标二抗（1:5000），37℃孵育1小时；TMB底物溶液显色10-30分钟，2M硫酸终止反应后，酶标仪450nm波长读取OD值。

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