纤维连接蛋白/Ugl-Y3抗体 新品

纤维连接蛋白/Ugl-Y3抗体

原理特点

靶向Fibronectin，是一种二聚体糖蛋白，以可溶形式存在于血浆，以不溶形式存在于细胞外基质。它通过RGD序列结合整合素，介导细胞粘附、迁移和分化。该抗体用于研究细胞外基质重塑、伤口愈合和肿瘤转移。
英文名称:Fibronectin/Ugl-Y3 Rabbit pAb
中文名称:纤维连接蛋白/Ugl-Y3抗体

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:CIG; Cold insoluble globulin; DKFZp686F10164; DKFZp686H0342; DKFZp686I1370; DKFZp686O13149; ED B; ED-B; fibronectin 1; FINC; FN 1; FN; FN1; FNZ; GFND; GFND2; LETS; Migration stimulating factor; MSF; Transformation sensitive protein; FINC_HUMAN; Fibronectin; Cold-insoluble globulin; Ugl-Y3.

交叉反应:Human,Mouse,Rat

抗体来源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human Fibronectin/Ugl-Y3

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Polyclonal

理论分子量：259 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景

多功能胞外基质糖蛋白，可溶性血浆型、不溶性细胞基质型，结合胶原、整合素、纤溶酶原。

基础生理：胚胎迁移、伤口凝血、组织修复；FN 缺失胚胎致死，血管、体腔无法成型。

肿瘤与纤维化：纤维化组织 FN 大量堆积；肿瘤 FN 重塑微环境，协助癌细胞黏附、远处定植转移。
样本处理与实验操作

1. Western Blot（免疫印迹）

样本制备

细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度

组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致

变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样

抗体孵育

转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时

一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中

TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时

再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像

2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）

样本前处理

脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗

抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温

封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟

抗体孵育

一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发

次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟

PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片

3. ICC/IF（细胞免疫荧光）

样本制备

细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟

通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次

封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合

抗体孵育

一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时

PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟

再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像

4. ELISA（酶联免疫吸附试验）

包被与封闭

用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜

弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时

抗体孵育

一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜

PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时

洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值

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