细胞表面趋化因子受体5（CD185）重组兔单抗 新品

细胞表面趋化因子受体5（CD185）重组兔单抗

原理特点

重组兔单抗形式，以高特异性和批次一致性识别CXCR5。它在多色流式细胞术和IHC中精准标记滤泡辅助T细胞和B细胞亚群，是研究生发中心反应和B细胞肿瘤微环境的可靠工具。
英文名称:CXCR5 Recombinant Rabbit mAb
中文名称:细胞表面趋化因子受体5（CD185）重组兔单抗

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:BLR 1; BLR1; Burkitt lymphoma receptor 1; Burkitt lymphoma receptor 1 GTP binding protein; C X C chemokine receptor type 5; C-X-C chemokine receptor type 5; CD 185; CD185; CD185 antigen; Chemokine C X C motif receptor 5; Chemokine CXC motif receptor 5; Chemokine receptor 5; CXC chemokine receptor type 5; CXC R5; CXC-R5; CXCR 5; CXCR-5; CXCR5_HUMAN; MDR 15; MDR-15; MDR15; MGC117347; Monocyte derived receptor 15; Monocyte-derived receptor 15.

交叉反应:Human,Mouse,Rat

抗体来源:Rabbit

免疫原:A synthesized peptide derived from human CXCR5

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Recombinant

克隆号：3B7

理论分子量：45 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景

重组工程兔源单抗，特异性靶向 CXCR5 胞外区，无杂交瘤批次差异，亲和力高于鼠源传统单抗。

适配流式细胞术精准圈选 Tfh 细胞亚群，多重荧光染色无交叉非特异结合。

适合临床人外周血、淋巴结样本标准化定量检测，用于自身免疫、淋巴瘤病理分型判读。
样本处理与实验操作

1. Western Blot（免疫印迹）

样本制备

细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度

组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致

变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样

抗体孵育

转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时

一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中

TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时

再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像

2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）

样本前处理

脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗

抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温

封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟

抗体孵育

一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发

次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟

PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片

3. ICC/IF（细胞免疫荧光）

样本制备

细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟

通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次

封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合

抗体孵育

一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时

PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟

再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像

4. ELISA（酶联免疫吸附试验）

包被与封闭

用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜

弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时

抗体孵育

一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜

PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时

洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值

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