产品属性
产品名称 | 水通道蛋白4单克隆抗体 | 货号 | YS-K7437 |
英文名称 | Aquaporin 4 Mouse mAb | 用途 | 仅供科研实验 |
商品介绍
产品应用:
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文别名:aquaporin 4; WCH4; Mercurial-insensitive water channel; MIWC; AQP 4; AQP4; Aquaporin4; HMIWC 2; HMIWC2; Mercurial insensitive water channel; MGC22454; MIWC; AQP4_HUMAN; Aquaporin-4; AQP-4.
交叉反应:Human,Mouse,Rat
抗体来源:Mouse
免疫原:Recombinant human Aquaporin 4 Protein
亚型:IgG1
性状:Size : 50ul/100ul/200ul LiquidSize : 200ug (PBS only) Lyophilized Note: Centrifuge tubes before opening. Reconstitute the lyophilized product in distilled water. Optimal concentration should be determined by the end user.
纯化方法:affinity purified by Protein G
克隆类型:Monoclonal
克隆号：6G1
理论分子量：36 kDa
浓度：1mg/ml
储存液：Size : 50ul/100ul/200ul0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.Size : 200ug (PBS only)0.01M PBS
保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特点
特异性识别AQP4蛋白的单一表位，具有高亲和力和低背景。AQP4是中枢神经系统主要水通道，集中在星形胶质细胞终足。该单抗是诊断视神经脊髓炎谱系疾病的关键试剂，患者血清中AQP4-IgG阳性是疾病确诊标准。
靶点背景
蛋白定位：星形胶质细胞足突特异性水通道，富集于血脑屏障、室管膜、视网膜 Müller 细胞。
生理病理功能：中枢脑组织水平衡、脑水肿调节核心分子；自身抗 AQP4 抗体是视神经脊髓炎（NMO）特异性致病抗体；调控胶质细胞钾缓冲、神经信号微环境。
应用方向：视神经脊髓炎诊断鉴别、脑水肿脑损伤、星形胶质细胞功能、中枢自身免疫病病理。
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样本处理与实验操作
1. Western Blot（免疫印迹）
样本制备
细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度
组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致
变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样
抗体孵育
转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时
一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中
TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时
再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像
2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）
样本前处理
脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗
抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温
封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟
抗体孵育
一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发
次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟
PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片
3. ICC/IF（细胞免疫荧光）
样本制备
细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟
通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次
封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合
抗体孵育
一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时
PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟
再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像
4. ELISA（酶联免疫吸附试验）
包被与封闭
用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜
弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时
抗体孵育
一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜
PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时
洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值
