WEE1蛋白抗体 新品

WEE1蛋白抗体

原理特点

该抗体特异性结合调控细胞周期进程的WEE1激酶蛋白专属抗原位点，通过抗原抗体特异性结合反应识别WEE1蛋白的天然及活化状态，靶向锁定细胞周期关键调控靶点。特点为识别覆盖性广、灵敏度高，可稳定检测WEE1蛋白的表达水平与磷酸化活化状态，特异性区分WEE1与其他激酶蛋白，无明显非特异性结合，适配细胞周期阻滞、肿瘤增殖调控机制研究。
英文名称:WEE1 Rabbit pAb
中文名称:WEE1蛋白抗体

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:DKFZp686I18166; EC 2.7.10.2; FLJ16446; Wee 1; WEE-1; WEE1 protein; Wee1 homolog; WEE1 homolog S. pombe; Wee1 like protein kinase; Wee1 tyrosine kinase; Wee1+homolog; Wee1+S. pombe homolog; WEE1A; Wee1A kinase; WEE1hu; WEE1 tyrosine kinase isoform 1; MGC105683; WEE1_HUMAN.

交叉反应:Human,Rat

抗体来源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human WEE1

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Polyclonal

理论分子量：72 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶点背景

激酶功能：WEE1是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在细胞周期G2/M checkpoint中发挥关键作用，通过磷酸化CDK1的Tyr15位点抑制其活性，阻止细胞进入有丝分裂，确保DNA复制完成和损伤修复。

肿瘤耐药：肿瘤细胞常依赖WEE1维持基因组稳定性，尤其是p53缺失的肿瘤，WEE1抑制剂可增强化疗和放疗对肿瘤细胞的杀伤作用，克服耐药性。

药物研发：WEE1抑制剂如AZD1775已进入临床试验阶段，与化疗联合治疗多种实体瘤，其抗体可用于检测WEE1表达水平，评估药物疗效。
样本处理与实验操作

1. Western Blot（免疫印迹）

样本制备

细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度

组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致

变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样

抗体孵育

转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时

一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中

TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时

再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像

2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）

样本前处理

脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗

抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温

封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟

抗体孵育

一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发

次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟

PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片

3. ICC/IF（细胞免疫荧光）

样本制备

细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟

通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次

封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合

抗体孵育

一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时

PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟

再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像

4. ELISA（酶联免疫吸附试验）

包被与封闭

用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜

弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时

抗体孵育

一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜

PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时

洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值

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