肠道病毒EV/柯萨奇病毒CA核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒可同步检测肠道病毒通用型（EV）与柯萨奇病毒A型（CA）核酸，是针对畜禽及人畜共患肠道病毒性疫病的联合检测产品。肠道病毒与柯萨奇A型病毒是引发畜禽发热、腹泻、呼吸道炎症及群体性发病的常见病原，传播速度快、易群体爆发。本产品适配畜禽临床疑似病例检测、养殖环境病毒筛查、群体性疫病溯源监测等场景，检测快速高效，可实现早期感染快速诊断，有效区分两类病毒感染类型，为肠道病毒性疫病的及时防控、隔离治疗、阻断传播提供精准的实验室诊断依据。

基础原理：

双重一步法荧光 RT-PCR 原理，EV 通用引物靶向肠道病毒 5’UTR 保守区，柯萨奇 A 组靶向 VP1 特异性区段，双探针荧光信号区分总肠道病毒与柯萨奇 A 组病毒。

胍盐类裂解缓冲液快速灭活病毒并结合 RNA，同步抑制 RNase 活性，咽拭子、粪便样本常温短期保存不降解病毒核酸。

梯度稀释体外转录 RNA 作为阳性质控，明确试剂盒最低检出拷贝数，用于手足口、肠道感染样本大批量筛查。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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