小反刍兽疫通用型/疫苗株（PPR-U/ PPR-V）双重核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒针对小反刍兽疫病毒研发双重检测体系，可同步识别小反刍兽疫通用型病毒核酸与疫苗株病毒核酸，精准区分自然感染与疫苗免疫后的核酸阳性反应，有效解决小反刍兽疫免疫监测与疫病排查难以区分的行业难题。产品主要应用于羊、牛等小反刍畜禽的免疫效果评估、常态化疫病筛查、养殖基地检疫验收等场景，检测特异性极高，不会与其他畜禽呼吸道疫病病毒发生交叉反应，能够快速甄别畜禽是自然野毒感染还是疫苗免疫所致阳性，为小反刍兽疫精准防控、免疫效果考核提供科学依据。

基础原理：

双重荧光定量 RT-PCR 鉴别原理，通用型靶点为 PPRV 基因组保守区，疫苗株靶向疫苗基因缺失标记位点，依靠不同荧光信号区分野毒总群与疫苗免疫毒株。

硅柱膜吸附核酸纯化配套试剂盒裂解液，快速裂解羊鼻拭子、淋巴结组织中病毒颗粒，选择性吸附 RNA，去除饲草杂质、蛋白色素干扰。

梯度拷贝数质粒阳性对照校准体系，可根据 Ct 值实现病毒核酸载量半定量，辅助区分免疫带毒与野毒感染。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰

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