罗湖病毒（TiLV）核酸检测试剂盒

‌产品名称：罗湖病毒（TiLV）核酸检测试剂盒

英文名称：Tilapia Lake Virus (TiLV) Nucleic Acid Detection Kit

货号：YS-P015491

分类：核酸检测试剂盒

规格‌：50T/盒

检测原理：
特异性 RdRp 聚合酶基因 RT-TaqMan 荧光 PCR，TiLV 独有 RNA 聚合酶序列，区分罗非鱼其他致病病毒。

巢式 RT-PCR 两步扩增，罗非鱼潜伏期病毒载量极低，两轮扩增富集靶 RNA 提升检出率。

恒温 CPA 扩增胶体金试纸显色，养殖罗非鱼脑组织粗提后快速检测，适用于鱼塘突发死亡排查。
实验流程：
1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

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注意事项：
所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰