猪瘟病毒/口蹄疫病毒通用型（CSFV/FMDV-U）核酸检测试剂盒

本试剂盒是针对猪瘟病毒、口蹄疫病毒研发的通用型双重核酸检测产品，依托成熟的核酸扩增检测技术，可一次性完成猪瘟病毒通用型毒株、口蹄疫病毒通用型毒株的核酸定性检测。产品适配猪只养殖排查、畜禽疫病常态化监测、屠宰检疫、种苗检疫等多种场景，能够快速甄别猪群中两类重大烈性动物疫病病毒感染情况，有效解决单一病毒检测效率低的问题，检测特异性强、灵敏度高，可精准区分靶标病毒核酸，为猪瘟、口蹄疫的早发现、早预警、早防控提供可靠的分子诊断依据，助力规模化猪场疫病风控和畜禽养殖安全生产。

基础原理：

采用一步法荧光定量 RT-PCR 技术，试剂盒内包含针对 CSFV、FMDV 保守基因区域特异性引物与荧光标记 TaqMan 探针，病毒 RNA 经逆转录生成 cDNA 后同步扩增，两种病毒扩增产物结合对应探针释放特异性荧光信号，依靠荧光通道区分两种病原，实现一管双检。

内置内参基因引物探针体系，同步扩增样本宿主内源参照核酸，用于监控样本核酸提取、逆转录与扩增全过程是否存在抑制物，避免假阴性结果。

采用热启动 Taq 酶体系，常温下引物、探针与酶无非特异性结合，仅升温至退火延伸阶段才启动扩增，大幅降低引物ẤẤ

‌操作步骤‌：

（一）反应体系配制（冰上操作，防酶失活与污染）

按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样（酶最后加，避免失活）。

轻轻涡旋混匀，短暂离心（3000rpm，10s），使液体沉至管底。

无热盖的 PCR 仪：加 1 滴矿物油覆盖液面，防止蒸发。

（二）PCR 程序设置（标准 35 循环）

预变性：94℃，3-5min（彻底变性模板 DNA）。

循环阶段（35 次）：

变性：94℃，30s（双链解链）。

退火：55-65℃，30s（引物结合模板，按引物 Tm 值调整）。

延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新链，1kb 片段约 1min）。

终延伸：72℃，5-10min（确保片段完整延伸）。

保温：4℃，∞（防止非特异性复性，短期保存）。

（三）产物检测（琼脂糖凝胶电泳）

制胶：1% 琼脂糖凝胶（1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液），加热融化后加核酸染料，倒胶插梳，凝固 30min。

上样：取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液，点样；同时加 DNA Marker（分子量对照）。

电泳：120V，20-30min，至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。

成像：凝胶成像系统观察条带，目标片段位置与预期一致则为阳性。

四、参数优化

退火温度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火温度一般低于 Tm 值 5℃，温度过高无条带，过低非特异性条带多。

Mg²⁺浓度：1.5-2.5mM，浓度过低酶活性低、产量少；过高非特异性扩增增加。

循环数：25-35 个循环，少于 25 个产物不足，多于 35 个易出现非特异性条带。

延伸时间：按目标片段长度调整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。

‌注意事项‌：

试剂禁止反复冻融，分装为小体积 - 20℃保存，融化后冰上放置不超过 2 h

所有耗材必须无 DNase/RNase，吸头一次性使用，废液、废弃 PCR 管 121℃高压灭菌后丢弃

阳性质粒高拷贝，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

试剂盒仅限科研检测，禁止人、临床样本检测

试剂盒过期、试剂浑浊、变色禁止使用

若大量样本出现阴性对照带污染，立即更换全新试剂盒，彻底紫外消毒实验台面、移液器

公司正在出售的产品：