猪瘟/猪蓝耳病病毒病毒通用型/猪圆环病毒型/猪伪狂犬野毒株（CSFV/PRRSV-U/PCV-/PRV-gE）核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒为四重多病原联合检测试剂，可同步检测猪瘟、普通蓝耳病、猪圆环病毒、猪伪狂犬野毒株核酸，覆盖猪场最常见的四类病毒性疫病。可精准区分伪狂犬野毒与疫苗毒，同时排查多重混合感染，检测精准、通量高，是规模化猪场综合疫病筛查、猪场净化、疫病全面监测的优选试剂。

基础原理：

针对猪瘟、通用型蓝耳、圆环病毒、伪狂犬野毒株特异性基因设计四组引物探针，通过四重荧光PCR同步扩增四类病原核酸，实现四重联合检测。

依托伪狂犬野毒株gE基因特异性序列区分野毒与疫苗毒，同时精准识别猪瘟、蓝耳、圆环病毒，兼顾疫病筛查与野毒鉴别，特异性极强。

纯化猪临床样本核酸后，通过四重PCR体系同步富集四类病原微量核酸，结合多通道荧光分型，快速鉴别多种猪病混合感染及野毒感染情况。

‌操作步骤‌：

1. 样本处理

提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）

标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。

按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板 | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

4. 上机程序

逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。

预变性：95℃ 2分钟。

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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