猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒(TGEV/PEDV)核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒为猪腹泻两大核心病毒双重检测试剂，可同步检测猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒核酸，精准鉴别仔猪腹泻主要致病病原。适配粪便、肠道组织、拭子等样本，检测快速高效，可快速区分两种腹泻疫病，解决临床症状难以区分的问题，助力猪场腹泻疫病精准诊断与对症防控。

基础原理：

针对猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒特异性保守基因设计双重引物探针，通过双重荧光PCR同步扩增两类病毒核酸，实现猪腹泻疫病联合检测。

两种腹泻病毒基因序列差异显著，检测体系互不干扰，可同时甄别两种病毒性腹泻病原，解决临床症状相似难以区分的检测难题。

提取猪肠道组织、粪便样本核酸后，通过双重PCR富集微量病毒核酸，结合荧光扩增曲线，快速诊断猪病毒性腹泻感染类型。

‌操作步骤‌：

（一）反应体系配制（冰上操作，防酶失活与污染）

按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样（酶最后加，避免失活）。

轻轻涡旋混匀，短暂离心（3000rpm，10s），使液体沉至管底。

无热盖的 PCR 仪：加 1 滴矿物油覆盖液面，防止蒸发。

（二）PCR 程序设置（标准 35 循环）

预变性：94℃，3-5min（彻底变性模板 DNA）。

循环阶段（35 次）：

变性：94℃，30s（双链解链）。

退火：55-65℃，30s（引物结合模板，按引物 Tm 值调整）。

延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新链，1kb 片段约 1min）。

终延伸：72℃，5-10min（确保片段完整延伸）。

保温：4℃，∞（防止非特异性复性，短期保存）。

（三）产物检测（琼脂糖凝胶电泳）

制胶：1% 琼脂糖凝胶（1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液），加热融化后加核酸染料，倒胶插梳，凝固 30min。

上样：取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液，点样；同时加 DNA Marker（分子量对照）。

电泳：120V，20-30min，至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。

成像：凝胶成像系统观察条带，目标片段位置与预期一致则为阳性。

四、参数优化

退火温度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火温度一般低于 Tm 值 5℃，温度过高无条带，过低非特异性条带多。

Mg²⁺浓度：1.5-2.5mM，浓度过低酶活性低、产量少；过高非特异性扩增增加。

循环数：25-35 个循环，少于 25 个产物不足，多于 35 个易出现非特异性条带。

延伸时间：按目标片段长度调整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。

‌注意事项‌：

避免反复冻融试剂，解冻后需充分混匀。

实验环境需严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），防止污染。

阳性对照需与样本分装操作。

本产品仅限科研用途，不可用于临床诊断。

操作时需穿戴防护装备，避免试剂接触皮肤或眼睛。

样本采集需遵循无菌原则，运输时使用干冰或冰袋保存。

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