猪蓝耳病病毒通用型/高致病性猪蓝耳病病毒(PRRSV-U/PRRSV-M)核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒专为猪蓝耳病毒株分型检测研发，双重靶点可同步鉴别通用型、高致病性猪蓝耳病病毒核酸，精准区分毒株致病类型，规避普通毒株与高危毒株混淆问题。检测灵敏度高、特异性强，适用于生猪疫病临床诊断、猪场毒株流行监测、疫病净化与精准防疫。

基础原理：

针对猪蓝耳病病毒通用保守基因与高致病性亚型特异性基因设计双重引物探针，通过双重荧光PCR同步扩增，实现通用筛查与高致病亚型分型。

通用型引物覆盖所有蓝耳毒株，高致病亚型引物仅靶向突变型特征基因，二者体系无交叉干扰，可精准区分普通毒株与高致病毒株。

纯化猪病料病毒核酸后，通过双重PCR放大两类靶标核酸信号，结合荧光扩增结果，快速判定蓝耳病感染及致病力亚型。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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