马梨形虫病(Piroplasmosis)双重核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒为马梨形虫病双重靶点核酸检测试剂，可同时特异性检测样品中马梨形虫的特征核酸序列，实现快速定性诊断。适用于马属动物血液、组织、体液等样本的病原检测，灵敏度高、特异性强，可有效区分马梨形虫与其他畜禽血液原虫，助力马梨形虫病的早期筛查、疫病诊断、养殖防疫与疫病溯源。

基础原理：

针对马梨形虫两种特异性保守基因序列分别设计引物探针，通过双重实时荧光PCR技术同步扩增两种靶标核酸，实现马梨形虫病的同步检测鉴别。

利用不同荧光基团标记两组特异性探针，可区分两种靶标基因的扩增信号，避免单一检测的漏检问题，特异性识别马梨形虫感染核酸。

提取病料样本总核酸后，通过PCR扩增体系同时富集两种马梨形虫特征核酸，结合双通道荧光检测，实现该病的快速双重定性检测。

‌操作步骤‌：

1. 样本处理

提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）

标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。

按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板 | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

4. 上机程序

逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。

预变性：95℃ 2分钟。

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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