布尼亚病毒（BV）核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒依托实时荧光PCR技术，靶向布尼亚病毒特异性基因靶点研发，可检测血液、组织样本中的布尼亚病毒核酸。布尼亚病毒包含多种致病亚型，易引发发热伴血小板减少综合征等重症疾病，试剂盒广谱性与特异性兼顾，可精准检出布尼亚病毒核酸，规避其他发热类病毒干扰，适用于临床不明原因发热病例排查、虫媒传染病监测、疫区防控及病原溯源工作。

基础原理：

靶向布尼亚病毒 S 片段核蛋白保守基因，逆转录荧光定量 PCR，广谱识别多种致病性布尼亚病毒。

蜱虫、血清样本研磨裂解后磁珠富集病毒核酸，去除昆虫组织杂质对扩增的抑制。

熔解曲线单一特征峰值作为阳性判定标准，多杂峰出现判定样本存在杂菌干扰。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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