呼吸道合胞病毒B 型（RSV-B）核酸检测试剂盒

本试剂盒针对B型呼吸道合胞病毒特异性基因靶点研发荧光PCR检测试剂，可定性检测呼吸道样本中的B型呼吸道合胞病毒核酸。B型毒株常与A型交替流行，是儿童及老年人群呼吸道感染的重要病原，试剂盒检测灵敏度高、分型准确，抗样本干扰能力强，能够快速完成病原鉴别，适用于临床呼吸道感染分型诊断、季节性疫情监测、院内感染防控及流行病学调研。

基础原理：

筛选 RSV-B 型 G 糖蛋白基因作为唯一靶标，锁核酸探针提升特异性，排除流感、副流感病毒交叉阳性。

恒温逆转录 LAMP 扩增，无需荧光定量设备，指示剂颜色变化肉眼判读，基层门诊适用。

梯度稀释病毒质粒做阳性梯度对照，验证试剂盒检出下限，保障低病毒载量轻症患者不漏检。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

试剂盒含生物源性质粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，阳性模板仅在生物安全柜开盖；

所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃；

试剂避免反复冻融，单次融化冰上放置不超过 2 h，使用完毕立即放回 - 20℃；

移液器吸头一次性使用，禁止重复吸取，防止交叉污染；

试剂盒仅用于科研检测，严禁人临床体外诊断；

扩增产物区产物不可带回试剂、提取区，防止气溶胶大面积污染实验室；

若阴性对照持续出现杂带，全部更换全新试剂盒，实验室台面、移液器紫外过夜消毒。

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