恶性疟原虫（PF）核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒采用实时荧光PCR技术，靶向恶性疟原虫特异性基因设计引物探针，可检测人体血液样本中的恶性疟原虫核酸。恶性疟是危害最严重的疟疾类型，发病急、致死率高，试剂盒检测灵敏度远超传统镜检方法，可实现早期、无症状低虫荷样本的精准检出，特异性强，不与间日疟等其他疟原虫交叉反应，适用于疟疾疫区筛查、临床疟疾确诊、入境人员检疫及疟疾防控效果监测。

基础原理：

靶向恶性疟原虫 18S rRNA 基因，逆转录荧光 PCR 扩增，高拷贝 RNA 模板大幅提升血样低虫血症检出灵敏度。

全血样本经红细胞裂解液溶解红细胞，释放疟原虫虫体，磁珠捕获寄生虫核酸，去除血红蛋白抑制物。

人源 β-actin 内参同步扩增，验证血液样本核酸提取成功，避免采血不足、溶血导致假阴性。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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