肉毒杆菌B型（CB-B）核酸检测试剂盒

本试剂盒依托实时荧光PCR技术，针对B型肉毒杆菌专属保守毒素基因研发，可定性检测各类食品、发酵制品、土壤及临床中毒样本中的B型肉毒杆菌核酸。B型肉毒杆菌是常见食源性致病菌，多发于肉制品、豆制品污染场景，试剂盒分型精准，不与其他型别肉毒杆菌交叉反应，检测高效稳定，广泛应用于食品安全风险排查、突发食物中毒事件应急检测及食品溯源监管工作。

基础原理：

筛选 bont/b 毒素基因保守区段设计 LNA 探针，探针 Tm 值更高，特异性更强，规避土壤杂菌同源序列干扰。

恒温 LAMP 扩增体系，依靠环引物加速扩增反应，常温显色判读，适合野外食品应急检测场景。

核酸提取采用有机相萃取法，酚氯仿分离蛋白与 DNA，获得高纯度核酸模板，保障高油脂罐头样本稳定检出。

‌操作步骤‌：

样本处理（样本处理区）

推荐使用磁珠法或离心柱法提取核酸，避免交叉污染。

试剂配制（试剂准备区）

反应体系（20μL/管）：19μL反应液 + 1μL酶液，分装后加入5μL待测核酸或质控品。

PCR扩增（核酸扩增区）

循环参数：

预变性：95℃ 2min（1循环）；

扩增：95℃ 15sec → 60℃ 30sec（45循环，60℃时采集荧光信号，FAM通道）。

结果分析

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长；

阴性：无Ct值或曲线平直；

可疑：40<Ct≤45，需复测确认。

质控要求：阳性质控Ct≤32，阴性质控无扩增。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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