肠集聚性大肠杆菌(EAEC)核酸检测试剂盒

本试剂盒基于实时荧光PCR技术，靶向肠集聚性大肠杆菌特异性致病基因设计检测靶点，可检测食品、饮用水、粪便样本中的肠集聚性大肠杆菌核酸。该菌株是引发迁延性腹泻、肠道感染的重要致泻性大肠杆菌，试剂盒特异性强、抗干扰能力好，可有效区分各类致泻性大肠杆菌，适用于临床肠道感染病原鉴别、食品水质安全检测、儿童腹泻病原筛查及食源性疾病溯源分析。

基础原理：

以 aatA 聚集黏附毒素基因作为靶标，双重 PCR 同步扩增管家基因，区分致病性 EAEC 与肠道共生大肠杆菌。

粪便样本经离心分层去除食物残渣，上层含菌液体经硅胶膜快速吸附纯化核酸，去除胆盐等 PCR 抑制物。

可视化胶体金层析检测扩增产物，阳性条带同时出现质控线与检测线，仅质控线显色判定阴性，无需荧光仪器。

‌操作步骤‌：

1. 样本处理

提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）

标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。

按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板 | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

4. 上机程序

逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。

预变性：95℃ 2分钟。

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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