沙门氏菌SPP-spec核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒靶向沙门氏菌spec特异性特征基因，采用多重荧光PCR检测原理，专门用于各类样本中沙门氏菌属致病菌的核酸定性检测。该靶点基因物种特异性极强，可精准区分沙门氏菌与其他肠道菌群，检测重复性好、准确率高，适用于食品药品监督抽检、畜禽养殖环境监测、餐饮行业卫生检测以及临床疑似沙门氏菌感染病例的辅助诊断，为沙门氏菌污染防控提供精准数据支撑。

基础原理：

选取 spec 分泌蛋白基因作为单一检测靶标，构建双重荧光通道 PCR，靶基因通道判定沙门氏菌，内参通道监控核酸提取质量。

改良盐析法纯化核酸，通过饱和氯化钠沉淀蛋白杂质，上清液直接作为 PCR 模板，适配污水、生鲜果蔬复杂基质样本。

根据 Ct 值实现半定量估算沙门氏菌载量，Ct 越小代表样本菌浓度越高，可用于污染程度分级评估。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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