沙门氏菌SPP-spy核酸检测试剂盒

本试剂盒针对沙门氏菌spy保守基因序列设计特异性引物与探针，基于荧光PCR技术实现沙门氏菌属核酸的快速扩增与检测。相较于传统检测方法，该试剂盒检测速度更快、灵敏度更高，可有效检出低载量沙门氏菌样本，能够规避杂菌干扰，适配生鲜肉类、蛋类、乳制品及环境样本检测，广泛用于食品安全风险排查、食源性疾病溯源监测及基层疾控沙门氏菌常规筛查工作。

基础原理：

靶向 spy 侵袭蛋白编码基因建立荧光探针 PCR，引物仅识别沙门氏菌属保守 spy 序列，精准区分非致病性大肠杆菌与沙门氏菌。

核酸提取采用煮沸裂解法，样本加裂解液沸水浴 10min 释放核酸，无需磁珠、硅胶柱耗材，降低检测成本。

内置竞争型内参核酸，若内参无扩增直接判定样本存在强抑制物，需重新提取核酸复测，杜绝漏检低浓度沙门氏菌。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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