C型产气荚膜杆菌(CP-C)核酸检测试剂盒 新品

本试剂盒基于实时荧光PCR检测技术，特异性针对C型产气荚膜杆菌核酸靶点设计引物与探针，可对临床样本、食品样本及环境样本中的C型产气荚膜杆菌进行快速定性核酸检测。产品特异性强，与其他常见梭菌、肠道致病菌无交叉反应，检测灵敏度高，能够精准检出微量菌体核酸，可有效辅助临床感染病因诊断、食品微生物安全筛查及环境致病菌污染监测，为产气荚膜杆菌相关感染防控与食品安全管控提供可靠的实验依据。

基础原理：

靶向 C 型产气荚膜杆菌特异性 cpb2 毒素基因设计荧光定量 PCR 上下游引物与 Taqman 探针，样本核酸经提取纯化后，引物特异性扩增目标毒力基因片段，探针结合扩增产物释放荧光信号实现定性检出。

采用磁珠法裂解菌体细胞壁，高效吸附富集样本内细菌基因组核酸，去除食物 / 粪便基质中的血红蛋白、多糖等 PCR 抑制物，保障低载量菌核酸可稳定扩增。

依靠实时荧光 PCR 循环阈值 Ct 值判定阴阳性，扩增曲线 S 型上升且 Ct≤35 判定阳性，无扩增曲线为阴性，特异性区分产气荚膜杆菌 A/B/C 各分ẤẤ

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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