猪高致病性蓝耳病毒RT-PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒基于逆转录PCR技术，专门针对猪高致病性蓝耳病病毒的RNA保守序列设计专属扩增体系，可特异性检测猪样本中的高致病性毒株核酸，区分普通蓝耳病毒与高致病性变异毒株。试剂盒逆转录效率高、扩增特异性强、检测灵敏度优异，可实现疫病早期快速确诊，适用于规模化猪场蓝耳病疫情监测、疑似病例确诊、毒株分型筛查及生猪养殖重大疫病防控。

基础原理：

提取病料病毒 RNA，逆转录酶催化合成 cDNA，去除组织基质抑制杂质。

引物靶向高致病性蓝耳病毒 Nsp2 缺失突变保守区段，区分经典与高致病毒株。

电泳检出对应缺失片段条带，判定样本携带高致病性蓝耳病毒。

‌操作步骤‌：

样本处理（样本处理区）

推荐使用磁珠法或离心柱法提取核酸，避免交叉污染。

试剂配制（试剂准备区）

反应体系（20μL/管）：19μL反应液 + 1μL酶液，分装后加入5μL待测核酸或质控品。

PCR扩增（核酸扩增区）

循环参数：

预变性：95℃ 2min（1循环）；

扩增：95℃ 15sec → 60℃ 30sec（45循环，60℃时采集荧光信号，FAM通道）。

结果分析

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长；

阴性：无Ct值或曲线平直；

可疑：40<Ct≤45，需复测确认。

质控要求：阳性质控Ct≤32，阴性质控无扩增。

‌注意事项‌：

所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰

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