人血管生长因子VEGF-cPCR检测试剂盒

‌产品名称：人血管生长因子VEGF-cPCR检测试剂盒

英文名称：Human Vascular Endothelial Growth Factor VEGF-c PCR Detection Kit

货号：YS-P015225

分类：PCR检测试剂盒

规格‌：50T/盒

检测原理：
提取人组织 RNA 反转录 cDNA，VEGF-C 特异性引物 PCR 扩增编码基因，电泳检测扩增条带定性转录本。

荧光定量 RT-PCR 定量 VEGF-C mRNA 拷贝数，评估肿瘤淋巴管生成相关基因表达水平。

扩增靶向 VEGF-C 特有外显子序列，不与 VEGF-A、VEGF-B 同源交叉扩增，分型特异性高。
实验流程：
样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

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注意事项：
1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。