乙型肝炎病毒cccDNA PCR测定试剂盒 新品

本试剂盒专门靶向乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（cccDNA）设计特异性扩增体系，采用精准PCR检测技术，可特异性检测肝组织及相关样本中的乙肝病毒cccDNA。作为乙肝病毒复制的核心模板，cccDNA检测对病情评估至关重要，本试剂盒特异性极强，可精准区分cccDNA与病毒其他核酸片段，灵敏度高、抗干扰能力强，适用于乙肝患者病情深度诊断、抗病毒治疗效果评估、病毒潜伏感染检测及临床病理研究。

基础原理：

采用特异性裂解液分离肝细胞内共价闭合环状 cccDNA，去除游离 HBV-DNA 干扰。

引物靶向 cccDNA 独有保守区段，仅环状完整病毒 DNA 可完成特异性扩增。

荧光定量 / 凝胶检测扩增产物，信号达标证明细胞内存在乙肝 cccDNA。

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

试剂盒含生物源性质粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，阳性模板仅在生物安全柜开盖；

所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃；

试剂避免反复冻融，单次融化冰上放置不超过 2 h，使用完毕立即放回 - 20℃；

移液器吸头一次性使用，禁止重复吸取，防止交叉污染；

试剂盒仅用于科研检测，严禁人临床体外诊断；

扩增产物区产物不可带回试剂、提取区，防止气溶胶大面积污染实验室；

若阴性对照持续出现杂带，全部更换全新试剂盒，实验室台面、移液器紫外过夜消毒。

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