羊伪结核棒状杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对羊伪结核棒状杆菌特异性基因设计扩增体系，通过PCR核酸扩增技术实现该致病菌的快速精准检测。试剂盒可特异性识别羊伪结核棒状杆菌，排除其他棒状杆菌及畜禽致病菌的干扰，检测灵敏度高、结果重复性好，能够实现感染初期低载量病菌的检出，适用于羊群养殖疫病筛查、患病个体确诊、养殖场环境检测及畜禽疫病流行病学调查，助力羊群伪结核病的预防与控制。

基础原理：

裂解菌体释放基因组 DNA，纯化清除脓液、组织基质中的 PCR 抑制因子。

引物靶向该菌毒力相关保守基因，经变性退火延伸循环大量复制靶片段。

电泳观察特异性条带，阳性条带代表样本存在羊伪结核棒状杆菌。

‌操作步骤‌：

样本处理（样本处理区）

推荐使用磁珠法或离心柱法提取核酸，避免交叉污染。

试剂配制（试剂准备区）

反应体系（20μL/管）：19μL反应液 + 1μL酶液，分装后加入5μL待测核酸或质控品。

PCR扩增（核酸扩增区）

循环参数：

预变性：95℃ 2min（1循环）；

扩增：95℃ 15sec → 60℃ 30sec（45循环，60℃时采集荧光信号，FAM通道）。

结果分析

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长；

阴性：无Ct值或曲线平直；

可疑：40<Ct≤45，需复测确认。

质控要求：阳性质控Ct≤32，阴性质控无扩增。

‌注意事项‌：

所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰

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