杏仁PCR检测试剂盒

本试剂盒是基于物种特异性基因扩增技术研发的食品源性成分检测试剂，专门针对杏仁特异性基因序列设计专属引物，可精准检测食品、农产品、加工辅料中是否含有杏仁源性成分。试剂盒特异性强，可有效区分杏仁与核桃、榛子、花生等坚果品类，杜绝交叉检测误差，灵敏度高，可检出微量杏仁掺杂成分，适用于食品真伪鉴别、过敏原筛查、农产品溯源及食品质量安全监管等场景。

基础原理：

研磨样本组织裂解细胞，提取植物总 DNA，清除多酚、油脂等 PCR 抑制物。

引物靶向杏仁物种特异性内源基因，仅与杏仁核酸结合并启动片段扩增。

凝胶电泳检测扩增片段，对应条带出现代表样本含有杏仁源性成分。

‌操作步骤‌：

（一）反应体系配制（冰上操作，防酶失活与污染）

按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样（酶最后加，避免失活）。

轻轻涡旋混匀，短暂离心（3000rpm，10s），使液体沉至管底。

无热盖的 PCR 仪：加 1 滴矿物油覆盖液面，防止蒸发。

（二）PCR 程序设置（标准 35 循环）

预变性：94℃，3-5min（彻底变性模板 DNA）。

循环阶段（35 次）：

变性：94℃，30s（双链解链）。

退火：55-65℃，30s（引物结合模板，按引物 Tm 值调整）。

延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新链，1kb 片段约 1min）。

终延伸：72℃，5-10min（确保片段完整延伸）。

保温：4℃，∞（防止非特异性复性，短期保存）。

（三）产物检测（琼脂糖凝胶电泳）

制胶：1% 琼脂糖凝胶（1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液），加热融化后加核酸染料，倒胶插梳，凝固 30min。

上样：取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液，点样；同时加 DNA Marker（分子量对照）。

电泳：120V，20-30min，至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。

成像：凝胶成像系统观察条带，目标片段位置与预期一致则为阳性。

四、参数优化

退火温度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火温度一般低于 Tm 值 5℃，温度过高无条带，过低非特异性条带多。

Mg²⁺浓度：1.5-2.5mM，浓度过低酶活性低、产量少；过高非特异性扩增增加。

循环数：25-35 个循环，少于 25 个产物不足，多于 35 个易出现非特异性条带。

延伸时间：按目标片段长度调整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。

‌注意事项‌：

试剂禁止反复冻融，分装为小体积 - 20℃保存，融化后冰上放置不超过 2 h

所有耗材必须无 DNase/RNase，吸头一次性使用，废液、废弃 PCR 管 121℃高压灭菌后丢弃

阳性质粒高拷贝，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

试剂盒仅限科研检测，禁止人、临床样本检测

试剂盒过期、试剂浑浊、变色禁止使用

若大量样本出现阴性对照带污染，立即更换全新试剂盒，彻底紫外消毒实验台面、移液器

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