新城疫病毒PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对禽类新城疫病毒特异性保守基因研发PCR检测体系，可精准检测鸡、鸭、鹅等禽类组织、咽喉拭子、粪便样本中的病毒核酸。试剂盒灵敏度高、特异性优异，可快速区分新城疫病毒与其他禽类病毒，检测速度快、结果稳定，适用于规模化禽类养殖场疫病筛查、畜禽检疫、新城疫疫情防控及禽类病毒学研究。

基础原理：

禽气管拭子、脾脏提取病毒 RNA，反转录获得病毒 cDNA 模板。

引物靶向新城疫病毒 F 融合蛋白基因，特异性扩增禽新城疫病毒核酸。

电泳检出特征条带，判定家禽新城疫病毒感染阳性样本。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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