嗜肺军团菌S rRNA基因(bp)常规PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒以嗜肺军团菌特异性S rRNA基因为核心检测靶点，基于常规PCR技术构建标准化扩增检测体系，可精准扩增目标基因bp特征片段，实现嗜肺军团菌的定性检测。试剂盒体系稳定、扩增条带清晰、结果易判读，特异性强，可精准区分嗜肺军团菌与其他军团菌及环境菌群，适用于空调水、饮用水、环境水样及临床样本的军团菌常规筛查检测。

基础原理：

空调水、痰液样本提取微生物总 DNA，靶向嗜肺军团菌 S rRNA 基因。

引物扩增固定 bp 长度的 rRNA 基因片段，仅识别军团菌属目标菌种。

电泳对应 bp 位置出现条带，判定样本检出嗜肺军团菌。

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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