肾综合症汉坦病毒ⅠⅡ型通用PCR检测试剂盒

本试剂盒为汉坦病毒通用型检测产品，采用PCR扩增技术，靶向肾综合征出血热汉坦病毒Ⅰ型、Ⅱ型共有保守基因位点设计检测体系，可一次性完成两种亚型病毒的同步筛查。试剂盒通用性强、亚型覆盖全面、无亚型漏检，检测灵敏度高、特异性优异，适用于临床感染样本、疫区环境样本、宿主动物样本的汉坦病毒检测，服务于出血热疫病防控与临床诊断。

基础原理：

患者血清、肺组织提取病毒 RNA，反转录生成 cDNA 作为扩增模板。

通用引物匹配汉坦病毒 Ⅰ、Ⅱ 型共同保守区段，两种亚型均可扩增。

电泳检出特异性条带，判定样本存在肾综合征出血热相关病毒核酸。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰

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