产肠毒素性大肠杆菌PCR检测试剂盒 新品

‌产品名称：产肠毒素性大肠杆菌PCR检测试剂盒

英文名称：Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) PCR Detection Kit

货号：YS-P014963

分类：PCR检测试剂盒

规格‌：50T/盒

检测原理：
引物特异性靶向产肠毒素大肠杆菌耐热肠毒素、不耐热肠毒素编码基因，仅能结合携带毒力基因菌株的核酸，排除普通大肠杆菌干扰。

经变性 - 退火 - 延伸多轮温度循环，依靠 Taq DNA 聚合酶对目标毒力基因片段进行指数级扩增，放大样本中微量病原菌核酸信号。

扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测，将电泳条带分子量与试剂盒阳性对照条带比对，判定样本是否存在产肠毒素性大肠杆菌。
实验流程：
1. 样本处理

提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）

标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。

按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板 | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

4. 上机程序

逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。

预变性：95℃ 2分钟。

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

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注意事项：
1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。