副结核杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒聚焦副结核杆菌核酸特异性检测，采用优化的PCR反应体系，适配畜禽各类生物样本的核酸扩增检测。产品抗干扰能力强，可有效规避样本中杂质、杂菌核酸的干扰，检测灵敏度高，可检出微量病原核酸，能够快速判定畜禽是否存在副结核杆菌感染，适用于畜牧养殖行业的疫病常态化监测、患病畜禽筛查及疫病传播风险防控。

基础原理：

引物选用副结核杆菌 fapP 毒力相关基因专属序列，从基因层面锁定该致病菌，特异性强。

对患病动物组织核酸模板进行连续温度循环扩增，放大低载量病原菌核酸信号。

扩增结束后通过电泳条带大小匹配预期片段长度，快速判定动物是否感染副结核杆菌。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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