副鸡嗜血杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对禽类致病原副鸡嗜血杆菌的保守基因序列设计扩增体系，可对鸡咽喉拭子、鼻腔分泌物、病变组织等禽类样本中的副鸡嗜血杆菌核酸进行定性检测。检测快速高效，可大幅缩短传统细菌分离培养的检测周期，特异性无交叉反应，能够精准诊断鸡传染性鼻炎等由副鸡嗜血杆菌引发的禽类疫病，适用于规模化养鸡场疫病筛查、畜禽疫病防控及养殖环境病原监测。

基础原理：

引物针对副鸡嗜血杆菌 hxuA 血红素利用基因设计，可特异性识别该禽呼吸道致病菌核酸。

提取鸡咽喉、气囊拭子细菌 DNA，经 PCR 循环扩增富集目标片段，用于鸡传染性鼻炎病原检测。

配套阳性菌株核酸对照，验证每批次试剂盒扩增有效性，避免养殖疫病漏检。

‌操作步骤‌：

（一）反应体系配制（冰上操作，防酶失活与污染）

按 “水→缓冲液→dNTP→引物→模板→Taq 酶” 顺序加样（酶最后加，避免失活）。

轻轻涡旋混匀，短暂离心（3000rpm，10s），使液体沉至管底。

无热盖的 PCR 仪：加 1 滴矿物油覆盖液面，防止蒸发。

（二）PCR 程序设置（标准 35 循环）

预变性：94℃，3-5min（彻底变性模板 DNA）。

循环阶段（35 次）：

变性：94℃，30s（双链解链）。

退火：55-65℃，30s（引物结合模板，按引物 Tm 值调整）。

延伸：72℃，1min/kb（Taq 酶合成新链，1kb 片段约 1min）。

终延伸：72℃，5-10min（确保片段完整延伸）。

保温：4℃，∞（防止非特异性复性，短期保存）。

（三）产物检测（琼脂糖凝胶电泳）

制胶：1% 琼脂糖凝胶（1g 琼脂糖 + 100mL 1×TAE 缓冲液），加热融化后加核酸染料，倒胶插梳，凝固 30min。

上样：取 5μL PCR 产物 + 1μL 上样缓冲液，点样；同时加 DNA Marker（分子量对照）。

电泳：120V，20-30min，至溴酚蓝迁移至凝胶 2/3 处。

成像：凝胶成像系统观察条带，目标片段位置与预期一致则为阳性。

四、参数优化

退火温度（Tm）：引物 Tm 值 = 4×(G+C)+2×(A+T)，退火温度一般低于 Tm 值 5℃，温度过高无条带，过低非特异性条带多。

Mg²⁺浓度：1.5-2.5mM，浓度过低酶活性低、产量少；过高非特异性扩增增加。

循环数：25-35 个循环，少于 25 个产物不足，多于 35 个易出现非特异性条带。

延伸时间：按目标片段长度调整，≤1kb 用 1min，1-3kb 用 2-3min。

‌注意事项‌：

避免反复冻融试剂，解冻后需充分混匀。

实验环境需严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），防止污染。

阳性对照需与样本分装操作。

本产品仅限科研用途，不可用于临床诊断。

操作时需穿戴防护装备，避免试剂接触皮肤或眼睛。

样本采集需遵循无菌原则，运输时使用干冰或冰袋保存。

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