木霉属通用PCR检测试剂盒

本试剂盒基于PCR分子扩增技术，靶向木霉属真菌共有保守核酸序列设计通用扩增体系，可精准检测土壤、植物、仓储粮食、环境样本中的木霉属真菌核酸。试剂盒可批量筛查各类木霉污染，灵敏度高，可检出微量真菌核酸，适用于农业作物真菌病害监测、仓储物资霉变检测、土壤微生物污染评估及环境真菌防控。

基础原理：

提取土壤、植物病斑样本内真菌菌丝 DNA，获得木霉属核酸模板；

引物靶向木霉属真菌 ITS rDNA 保守区域进行属水平通用扩增；

只要样本含有任意木霉属物种，即可扩增出对应的目标核酸片段。

‌操作步骤‌：

1. 样本处理

提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。

2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）

标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。

按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR反应液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| RNA模板 | 2 |

| RNase-free水 | 补至20 |

4. 上机程序

逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。

预变性：95℃ 2分钟。

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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