旋毛虫通用PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对所有旋毛虫属物种共有保守核酸序列设计通用PCR扩增体系，可一次性筛查各类样本中的布氏旋毛虫、米氏旋毛虫、伪旋毛虫等所有旋毛虫病原。试剂盒通用性强、筛查效率高，适合批量样本初筛，特异性不与其他寄生虫交叉反应，适用于肉类批量检疫、养殖场常态化寄生虫筛查、公共卫生食品安全监测。

基础原理：

提取样本中所有旋毛虫虫体的总基因组 DNA，去除组织抑制成分；

引物选取旋毛虫属所有物种共有的保守基因进行广谱扩增；

可先筛查样本是否存在旋毛虫感染，后续再开展具体虫种分型。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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