蛙病毒PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒基于实时荧光PCR技术，特异性针对蛙病毒基因组保守区域设计检测体系，可精准检测两栖类动物样本中的蛙病毒核酸。蛙病毒是引发蛙类、蟾蜍等两栖动物大规模死亡的主要病原，传染性强、致死率高，本试剂盒特异性高、无交叉反应，可适配蛙类组织、水体环境样本等多种检测样本，适用于水产养殖疫病防控、两栖动物种质资源保护、水域生态病原监测等场景。

基础原理：

引物靶向蛙病毒保守 DNA 聚合酶基因，可特异性识别蛙病毒家族病原核酸。

提取蛙类组织、水体样本内病毒核酸，经反复热循环扩增靶标片段提升检出灵敏度。

根据扩增结果判定样本是否存在蛙病毒感染，用于两栖类疫病监测。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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