同禽腺病毒型鹌鹑支气管炎病毒PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对禽腺病毒型鹌鹑支气管炎病毒特异性基因设计扩增体系，可精准检测鹌鹑、禽类样本中的该病毒核酸，专一性区分其他禽腺病毒亚型。试剂盒检测快速、特异性强，适配禽类气管拭子、肺组织、泄殖腔拭子等样本。适用于鹌鹑支气管炎疫病临床诊断、禽类腺病毒分型筛查、养殖禽场疫病防控及禽源病毒流行病学研究。

基础原理：

采集鹌鹑气管、肝脏样本，裂解病毒提取 DNA 模板。

引物靶向鹌鹑支气管炎病毒（禽腺病毒亚型）六邻体蛋白保守基因。

荧光扩增检测病毒核酸，用于鹌鹑呼吸道疫病诊断。

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

分区操作：试剂配制、样品处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免交叉污染

无菌操作：使用带滤芯枪头、一次性手套和专用工作服

试剂准备：所有试剂使用前需完全融化，震荡混匀后短暂离心

避光保存：含荧光探针的试剂需避光保存和操作

防止污染：阳性对照操作需最后进行，实验后用10%次氯酸或75%酒精消毒工作台

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