黑色普雷沃菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒专为黑色普雷沃菌核酸检测研发，依托菌种特异性保守基因设计扩增引物，可专一性检测黑色普雷沃菌核酸，精准鉴别该菌种引发的各类厌氧感染病症。试剂盒反应体系优化完善，可耐受复杂样本基质干扰，检测结果稳定、准确率高。适用于畜禽厌氧性炎症、组织感染病例的病原确诊、养殖环境致病菌监测、微生物菌种鉴定及相关疫病防控研究。

基础原理：

对口腔病灶样本进行菌体裂解，提取基因组 DNA 并纯化。

引物靶向黑色普雷沃菌特异性毒力基因，避免与其他口腔厌氧菌交叉反应。

根据扩增曲线有无有效信号判断该致病菌是否存在。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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