猪生殖与呼吸综合症病毒欧洲株PCR检测试剂盒

本试剂盒精准靶向猪生殖与呼吸综合症病毒欧洲株特异性基因位点设计引物，可专一性检测欧洲株毒株核酸，有效区分美洲株及其他猪源病毒毒株。试剂盒检测灵敏度高、分型精准，可精准识别低载量隐性感染样本，适配猪血清、肺组织、鼻咽拭子等样本。主要用于猪场蓝耳病欧洲株感染的鉴别诊断、跨境引种疫病筛查、猪场毒株分型监测及疫病精准防控，解决传统检测无法精准区分毒株亚型的难题。

基础原理：

提取病猪肺、淋巴结、血清内病毒 RNA，逆转录制备扩增模板。

引物靶向欧洲株特有的 ORF7 基因变异位点，可精准区分欧洲株与美洲株毒株。

根据扩增 Ct 值判定阳性结果，用于猪场蓝耳病欧洲株专项流行病学排查。

‌操作步骤‌：

样本处理（样本处理区）

推荐使用磁珠法或离心柱法提取核酸，避免交叉污染。

试剂配制（试剂准备区）

反应体系（20μL/管）：19μL反应液 + 1μL酶液，分装后加入5μL待测核酸或质控品。

PCR扩增（核酸扩增区）

循环参数：

预变性：95℃ 2min（1循环）；

扩增：95℃ 15sec → 60℃ 30sec（45循环，60℃时采集荧光信号，FAM通道）。

结果分析

阳性：Ct值≤40，扩增曲线呈指数增长；

阴性：无Ct值或曲线平直；

可疑：40<Ct≤45，需复测确认。

质控要求：阳性质控Ct≤32，阴性质控无扩增。

‌注意事项‌：

所有试剂避免反复冻融，可分装小体积冻存；融化后冰上放置不超过 2 h，酶失活会直接导致无扩增条带

阳性质粒拷贝数极高，开盖全程在生物安全柜操作，防止气溶胶污染实验室

所有耗材必须无核酸酶，枪头一次性使用；实验后 PCR 管、废液 121℃高压灭菌后丢弃

试剂盒出现浑浊、变色、结冰分层、过期禁止使用

仅限科研检测，严禁用于人体临床疾病诊断、食品出厂检疫等合规检测场景

土壤、粪便、腐殖质样本优先使用磁珠法提取核酸，减少抑制剂干扰

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