无乳支原体PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒专为无乳支原体核酸检测研发，靶向该菌株特异性基因序列构建PCR体系，可精准检测牛羊乳腺组织、乳汁样本中的无乳支原体。该菌是反刍动物乳腺炎主要致病菌，试剂盒检测快速、灵敏度高，可早期筛查隐性乳腺炎感染，适用于规模化牧场疫病防控、乳汁安全检测、乳腺疾病病原诊断。

基础原理：

牛羊乳汁、乳腺组织提取支原体 DNA，靶向无乳支原体黏附基因特异性扩增。

实时荧光定量检测乳汁中支原体载量，评估乳房炎感染程度。

乳汁蛋白中和缓冲液，消除乳蛋白抑制 PCR 酶活性。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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