海豹分支杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒聚焦海豹分支杆菌核酸检测，靶向海豹源专属分枝杆菌基因序列构建PCR体系，可精准检测海洋哺乳动物样本中的海豹分支杆菌。产品特异性强、无其他分枝杆菌交叉反应，适用于海洋动物疫病监测、水族馆动物健康检测、海洋人畜共患病病原筛查。

基础原理：

海洋哺乳动物脏器提取分枝杆菌 DNA，靶向海豹分枝杆菌特有间隔基因扩增。

探针水解产生特异性荧光信号，无靶菌则无荧光。

海水样本脱盐缓冲液，去除盐分对 PCR 体系破坏。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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