肉芽肿性曼氏杆菌病PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对引发肉芽肿性曼氏杆菌病的致病菌株研发，通过特异性PCR扩增技术，精准检测样本中肉芽肿性曼氏杆菌的核酸。试剂盒特异性好、检出率高，可有效检测动物隐性感染、轻症感染样本，弥补传统病理检测的局限性，能够快速辅助诊断畜禽肉芽肿性疫病，适用于临床病例检测、养殖场疫病排查、区域流行病学调查等场景。

基础原理：

肉芽肿病灶样本破壁提取细菌 DNA，靶向肉芽肿致病相关基因设计特异性引物扩增。

荧光定量 PCR 连续监测扩增荧光增量，Ct 值小于临界值判定样本阳性感染。

引物避开曼氏杆菌属同源保守序列，仅识别肉芽肿致病亚型菌株核酸。

‌操作步骤‌：

DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA，确保无抑制剂残留。

标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管为7至2号，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用带滤芯枪头）。

梯度稀释阳性对照：

7号管：加入5 μL 1×10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品；

依次稀释至2号管，最终浓度跨5个数量级（1×10^7至1×10^3拷贝/μL）。

所有标准品置于冰上备用，避免反复冻融。

试剂配制（试剂准备区）

反应液避光解冻后涡旋混匀，短暂离心分装至PCR管。

每反应体系20 μL，含预混引物、荧光染料及缓冲液。

加样（样本处理区）

分别加入5 μL待测DNA或标准品至反应管，阴性对照以DEPC-H2O替代。

盖紧管盖，避免气泡干扰。

PCR扩增（核酸扩增区）

按以下程序运行定量PCR仪：

预变性：95℃ 2分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析（可选）。

‌注意事项‌：

试剂盒含生物源性质粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，阳性模板仅在生物安全柜开盖；

所有一次性耗材、PCR 废液、电泳凝胶实验后 121℃高压灭菌再丢弃；

试剂避免反复冻融，单次融化冰上放置不超过 2 h，使用完毕立即放回 - 20℃；

移液器吸头一次性使用，禁止重复吸取，防止交叉污染；

试剂盒仅用于科研检测，严禁人临床体外诊断；

扩增产物区产物不可带回试剂、提取区，防止气溶胶大面积污染实验室；

若阴性对照持续出现杂带，全部更换全新试剂盒，实验室台面、移液器紫外过夜消毒。

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