灰马杜拉分枝菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒基于聚合酶链式反应技术，特异性针对灰马杜拉分枝菌的保守基因序列设计引物，可精准检测样本中该致病菌的核酸成分。试剂盒配套齐全、操作简便，特异性强，不会与其他分枝杆菌、真菌及常见杂菌发生交叉反应，灵敏度高，能够快速甄别临床、环境样本中的灰马杜拉分枝菌感染情况，为马杜拉菌病的早期诊断、流行病学调查及防控治理提供精准的分子检测依据。

基础原理：

提取样本中灰马杜拉分枝菌基因组 DNA，采用特异性引物靶向该菌独有保守基因片段，经高温变性、低温退火、延伸循环扩增靶标核酸。

扩增过程嵌入荧光标记探针，仅与灰马杜拉分枝菌扩增产物结合释放荧光信号，依据荧光有无判定菌株存在。

配套阴性、阳性对照同步扩增，排除核酸提取抑制物、引物非特异性结合造成的假阳性 / 假阴性干扰。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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