小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验原理，微孔板固相包被有小鼠胚胎干细胞系MESPU30（M30）特异性识别抗体。检测时，样本与标准品中的M30抗原与固相抗体特异性结合，洗涤去除游离杂质成分后，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体，形成稳定的免疫夹心结构。充分洗涤后加入TMB底物显色，酶促反应产生的显色产物浓度与样本中M30含量成正比，终止反应后测定吸光度值，依据标准曲线可精准定量样本中目标蛋白浓度。
基本参数‌：

产品名称：小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒

英文名称：M30 ELISA Kit
货号：Y-E2224

规格：48T/96T

灵敏度：最低检出 0.12ng/mL

检测范围：0.26ng/mL～24ng/mL

反应时间：样本孵育 115min，酶标记物 64min，避光显色 27min，终止 5min 内检测，总时长 206min

保存条件：试剂盒 2～8℃；标准品分装 - 20℃冻存，其余组分 2～8℃常规存放

显色系统：高灵敏度 TMB 显色体系

检测波长：450nm+630nm 双波长校正

标准曲线绘制：八点倍比稀释标准品，四参数 Logistic 拟合标准曲线

注意事项：干细胞裂解样本去除细胞团块；全程无菌操作防止微生物干扰显色。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温平衡 25min，稀释浓缩洗涤液，配制 M30 抗原标准品稀释梯度。

酶标板加入标准品、胚胎细胞裂解样本、空白稀释液，标记孔位。

直接添加酶标记检测抗体，封板 37℃孵育 61min。

洗板 4 次，浸泡 32s / 次，彻底拍干孔内洗液。

避光显色底物反应 15min。

加入终止液终止反应，轻振酶标板混匀。

酶标仪检测 OD 值，计算 M30 表达量。
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