人游离血红蛋白(f-Hb)ELISA试剂盒

本试剂盒基于双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固相包被有人游离血红蛋白特异性单克隆抗体，加入梯度标准品及待测样本后，样本内的游离血红蛋白与固相抗体发生特异性免疫结合，洗涤去除未结合组分，随后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗人游离血红蛋白抗体，形成特异性免疫夹心复合物，经洗涤去除多余酶标抗体后，加入TMB底物液催化显色，显色深浅与样本中游离血红蛋白含量呈正相关，终止反应后通过酶标仪检测OD值，对照标准曲线精准定量样本中f-Hb浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出下限 0.08μg/mL

检测范围：0.16μg/mL - 10μg/mL

反应时间：整体流程 105min，一抗孵育 40min，二抗孵育 30min，显色终止 15min

保存条件：试剂盒整体 2～8℃冷藏；浓缩洗涤液室温存放，出现结晶温水溶解即可

显色系统：TMB 双液显色体系，A 液 B 液等量混合使用

检测波长：单波长 450nm 直接读数

标准曲线绘制：采用线性回归法拟合标准曲线，剔除偏离过大标准孔后计算样本浓度

注意事项：溶血样本会严重干扰本指标检测，送检样本严禁溶血
关键注意事项：

本试剂盒仅科研体外检测，严禁临床诊断使用。

全程避免试剂、板条强光直射，TMB 见光易失效。

移液器吸头一次性使用，杜绝交叉污染；所有操作无酶、无热源。

孵育温度严格控制 37℃，温度偏低会降低 OD 值、灵敏度下降。

洗板必须充分，残液会造成非特异性结合，背景偏高。

终止后需快速读数，放置过久吸光度会漂移，结果失真。

终止液含稀硫酸，避免接触皮肤、眼睛，若不慎接触大量清水冲洗。

实验废弃物按生物安全废弃物规范处理。

不同批次试剂盒组分不可混用。

试剂盒运输全程 2～8℃冷链，严禁高温暴晒。

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实验操作流程：

取出试剂盒所有组分室温放置 25min，按说明书倍比稀释 f-Hb 标准品系列浓度，待测样本用配套稀释液适度稀释，标记酶标板各孔组别。

空白孔加稀释缓冲液，标准品孔加不同浓度 f-Hb 标准品，样本孔加入预处理后的待测体液样本，加样枪垂直加样防止交叉污染。

一步法体系直接向全部孔中添加酶标记一抗工作液，微量震荡仪低速震荡 30s 使孔内液体充分混匀。

封板封口后置于 37℃湿盒避光孵育 55min，禁止中途掀开封板膜，防止挥发与外源污染。

手动洗板操作：每孔加满洗涤液，静置 25s 后倒扣拍净，重复洗板 4 次，最后一次充分拍干孔内残余洗液。

避光条件下每孔加入 TMB 单组份显色液，37℃避光显色 12min，对照标准品孔颜色深浅把控显色时长。

加入 2M 硫酸终止液终止反应，酶标仪 450nm 波长测定吸光度，拟合标准曲线换算样本游离血红蛋白含量并记录数据。