人幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)ELISA试剂盒

本试剂盒基于间接ELISA检测原理，微孔板预先固定幽门螺旋杆菌特异性抗原，加入待测血清样本后，样本中的Hp-IgM抗体与固相抗原特异性结合，洗涤去除未结合组分，加入酶标记抗人IgM二抗进行特异性结合，充分洗涤后加入显色底物发生酶促显色反应，终止显色后检测吸光度，依据标准曲线定量检测样本中Hp-IgM抗体的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：检出临界 OD 差值 0.07

检测范围：IgM 抗体滴度 1:10~1:1280

反应时间：样本孵育 85min，酶二抗 50min，显色 20min，总 155min

保存条件：整套试剂 2~8℃，洗涤液稀释后 24h 内使用

显色系统：OPD 显色底物体系

检测波长：492nm 检测，650nm 参比校正

标准曲线绘制：六点阳性血清梯度稀释，四参数拟合参考曲线

注意事项：类风湿因子干扰 IgM 检测，需设置阻断孔排除假阳性
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。

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实验操作流程：

血清样本稀释处理：急性期血清样本稀释配比混匀，室温静置 8min；试剂盒室温平衡 29min。

加样密封免疫孵育：空白、标准、样本孔加样与酶液，覆膜封口，37℃孵育 62min。

洗板去除游离杂质：洗涤液浸泡微孔 35s，洗板 5 次，拍干微孔废液。

底物显色：加入显色双液避光混匀，37℃显色 14min。

终止反应：添加终止液轻摇酶标板混匀体系。

酶标仪测 OD：450nm 波长检测吸光度逐条记录。

阴阳性判定：参照试剂盒临界 OD 值判读 Hp-IgM 阳性或阴性结果。