小鼠丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1) ELISA试剂盒

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA检测原理，酶标板微孔固相固定有抗小鼠丙酮酸脱氢酶E1（PDH E1）特异性抗体。检测过程中，样本与标准品中的PDH E1抗原与固相抗体特异性结合，洗去未结合的游离成分后，加入辣根过氧化物酶标记的配对检测抗体，构建固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。充分洗涤后加入TMB底物显色，酶促反应的显色深浅与样本中PDH E1含量成正比，终止反应后测定吸光度，依据标准曲线可精准计算样本中目标蛋白的含量。
基本参数‌：

产品名称：小鼠丙酮酸脱氢酶E1(PDH E1) ELISA试剂盒

英文名称：PDH E1 ELISA Kit
货号：Y-E2202

规格：48T/96T

灵敏度：检出下限 0.10ng/mL

检测范围：0.22ng/mL～38ng/mL

反应时间：样本 37℃孵育 78min，酶标记物 46min，显色 16min，终止后立即测值，总时长 140min

保存条件：试剂盒 2～8℃储存，严禁冷冻；酶结合物冻融一次即报废

显色系统：双液混合 TMB 显色

检测波长：450nm 单波长

标准曲线绘制：六组标准浓度，线性拟合标准曲线，剔除偏离值后计算

注意事项：线粒体提取样本避免氧化降解；操作全程尽量避光。
通用注意事项：

样本要求

血清、血浆避免严重溶血、脂血、黄疸；组织匀浆充分离心去除沉淀；样本分装冻存，反复冻融≥3 次会导致抗原降解，检测值偏低。

温度控制

孵育温度严格 37℃，温箱温度波动、室温过低会降低结合效率，背景升高、重复性变差。

避光操作

TMB 底物、酶结合物、神经递质 / 维生素类靶标样本见光易氧化，显色全程避光，试剂避光存放。

洗板规范

洗涤不充分会造成高背景、假阳性；拍干时使用干净吸水纸，禁止交叉污染微孔。

污染防控

实验耗材无 DNase、RNase、蛋白酶；枪头一次性更换，标准品与样本避免交叉加样；底物液变色、出现沉淀不可使用。

安全防护

终止液含稀硫酸，具有腐蚀性，避免接触皮肤、黏膜；实验废液集中收集中和后处理，不可直接倾倒。

失效判定

试剂盒超出有效期、试剂浑浊变色、标准品梯度无明显颜色差异，均判定失效，禁止继续实验。

稀释校正

样本 OD 值高于最高标准孔时，必须稀释重测，最终结果乘以稀释倍数；低于最低检测限标注 “低于试剂盒灵敏度”。

空白对照

空白孔吸光度应极低，若空白孔 OD＞0.1，说明洗涤不充分或试剂污染，实验作废重做。

储存禁忌

试剂盒不可冷冻结冰，冷冻会造成酶标抗体蛋白变性，直接导致试剂盒完全失效。
实验步骤如下：

试剂盒室温放置 33min 回温，稀释洗涤液，配制 PDH E1 梯度标准溶液。

酶标板添加标准品、小鼠细胞裂解样本、空白对照液，规范加样。

一步加入酶结合工作液，密封封板，37℃避光孵育 72min。

弃液洗板 5 次，每次浸泡 30s，吸水纸拍干微孔。

显色混合液遮光显色 18min。

滴加终止液终止反应，混匀板面。

双波长测值，定量样本 PDH E1 表达量。
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